組培苗在培養(yǎng)過程中容易受微生物污染，污染直接影響生產(chǎn)成本及效率，打亂生產(chǎn)計劃，因此，減少培養(yǎng)環(huán)境的微生物污染對降低組培室的污染率至關(guān)重要，空氣消毒是切斷微生物傳播途徑，將污染降低的有力措施。中草藥在我國擁有著悠久的歷史，是我國醫(yī)學(xué)上的珍寶，中藥功效各異，抗菌消炎是其中的重要功效之一，中草藥煙熏消毒是古時流行的一種空氣消毒方法。隨著環(huán)保意識觀念的增強，近年來人們在對消毒制劑的選擇上越來越傾向于天然、無不良反應(yīng)、消毒效果強的中草藥，將中草藥用于組培室的空氣消毒少有報道，但在各大醫(yī)院消毒中卻時常有報道，可見中草藥在空氣消毒方面有其獨特的效果。本研究利用4種中草藥艾葉、大青葉、訶子及連翹對組培室進(jìn)行熏蒸消毒，從品種、用量及熏蒸時間3個方面探索中草藥對培養(yǎng)室空氣消毒的效果，旨在克服常規(guī)消毒方法的不足，開辟綠色健康、安全可靠的組培室空氣消毒新技術(shù)、新方法，為中草藥在組培室空氣消毒中的應(yīng)用及發(fā)展提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。

  1 材料與方法

  1.1 試驗材料供試材料艾葉、大青葉、訶子、連翹購買于中藥房。試劑與儀器：95%乙醇、MS培養(yǎng)基、瓊脂、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、超凈工作臺、培養(yǎng)皿、燒杯、滅菌鍋、托盤、打火機、量筒、pH試紙、鑷子。

  1.2 試驗方法

  1.2.1試驗材料的處理 艾葉可直接點燃;大青葉和訶子及連翹須與95%乙醇按1∶2的比例密閉浸泡24h備用。

  1.2.2 試驗場所 本試驗以百色學(xué)院化生樓組培室為消毒對象，組培室大小為92.48m3。在使用4種中草藥對組培室進(jìn)行試驗時室內(nèi)溫度、相對濕度均相同。在進(jìn)行中草藥熏蒸試驗前將組培室打掃干凈，關(guān)閉組培室門窗，除操作人員外，其他人員禁止入內(nèi)。

  1.2.3 采樣方法 將9個直徑為95mm含有MS培養(yǎng)基的平板放置在組培室的各個角落及中間位置，打開培養(yǎng)皿蓋使平板暴露在空氣中采用自然沉降法收集空氣中菌落數(shù)，采樣時間為30min，采樣期間禁止人員走動。將消毒前后采樣的平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后觀察培養(yǎng)皿中菌落數(shù)，并做好實驗記錄。采樣前后用75%酒精擦拭雙手，避免手上所帶菌落污染平板，影響試驗結(jié)果。

  1.2.4 不同中草藥熏蒸對組培室消毒效果影響 本試驗使用培養(yǎng)基為組織培養(yǎng)常用MS培養(yǎng)基。艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥的用量均為2.0g/m3。試驗期間不能使用其他消毒劑或物理方法對組培室進(jìn)行消毒。試驗前根據(jù)試驗用量及處理方式準(zhǔn)備好藥品。將中草藥置于托盤中在組培室中分5個點燃燒，使中藥中的有效成分揮發(fā)至空氣中，熏蒸1h后取樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復(fù)4次，用平均滅菌率比較滅菌情況，從中篩選出消毒效果佳的中草藥。

  1.2.5 適中草藥用量及適消毒時間的確定 將篩選出的佳消毒效果中藥進(jìn)行適中草藥用量及適消毒時間試驗，試驗用量分別為1.0g/m3、2.0g/m3和3.0g/m3，消毒時間按煙熏后0.5h、1h、1.5h、2h的時間分別進(jìn)行采樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復(fù)4次，用平均滅菌率比較滅菌情況。

  1.3 菌落的檢測與統(tǒng)計菌落檢測：在觀察結(jié)果時，根據(jù)菌落外觀按霉菌、細(xì)菌進(jìn)行菌落的分類。

菌落統(tǒng)計：統(tǒng)計好試驗前后各培養(yǎng)皿菌落數(shù)，根據(jù)奧氏公式分別計算熏蒸前和熏蒸后組培室空氣中的含菌量。