培養(yǎng)基的成分

  1、用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基迄今不下幾十種。歸納起來(lái)，任何一種培養(yǎng)基均有以下幾部分組成：無(wú)機(jī)鹽(大量元素、微量元素)，有機(jī)化合物(蔗糖、維生素類(lèi)、氨基酸、核酸及其他水解化合物)，鐵鹽螯合劑，植物激素。

  植物激素的純度對(duì)于組織培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。接種的外植體，其分化速度(長(zhǎng)芽)和分化方向(長(zhǎng)根)，均取決于所加激素的種類(lèi)、數(shù)量及比例。簡(jiǎn)言之，主要是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的加入量以及兩者的比例。一般生長(zhǎng)素類(lèi)包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸;細(xì)胞分裂素類(lèi)包括激動(dòng)素、芐基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。

  培養(yǎng)基中的糖類(lèi)主要是蔗糖，少數(shù)情況下使用葡萄糖。大量生產(chǎn)可使用蔗糖。糖在培養(yǎng)基中的作用是提供碳源，同時(shí)用于維持滲透平衡，瓊脂是固體培養(yǎng)基中的成分，作為固化劑支持。培養(yǎng)物在培養(yǎng)基的成本消耗中，瓊脂占有相當(dāng)大的比例，培養(yǎng)基中瓊脂的加入量一般為4-7g。

  2、在組織培養(yǎng)生產(chǎn)中，培養(yǎng)基的制備對(duì)母液的需求量相當(dāng)大，需一批一批地連續(xù)配制。為簡(jiǎn)化配制過(guò)程，提高工作效率，一般將各種所需藥品先配制成高濃度溶液，貯備起來(lái)。到配制培養(yǎng)基時(shí)，按要求的濃度取一定量稀釋即可;我們稱(chēng)這些高濃度的溶液為貯備液，習(xí)慣上稱(chēng)母液。

  制備母液時(shí)，先將所有藥品分成幾組，每組藥品制成一種母液。分組的原則是同組藥品混合溶解時(shí)不會(huì)發(fā)生質(zhì)的變化，也不產(chǎn)生沉淀。一般將藥品分成5組：大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)化合物類(lèi)和植物激素。其中植物激素母液有若干種，每種激素都先制成1mg/ml的溶液。

  母液制備注意事項(xiàng)

  1、藥品稱(chēng)量要盡可能準(zhǔn)確。大量元素用百分之一(千分之一)天平稱(chēng)取，而微量元素、有機(jī)物類(lèi)、植物激素等，則必須使用萬(wàn)分之一的天平。

  2、母液配制完畢注入試劑瓶后，一定要標(biāo)明母液的名稱(chēng)、序號(hào)、濃度和配制日期等。

  3、配制好的母液應(yīng)放置在冷藏箱內(nèi)保存，尤其是有機(jī)物和激素類(lèi)。

  培養(yǎng)基的配制

  1、將用于配制培養(yǎng)基的容器洗凈，加入培養(yǎng)基總量四分之三的蒸餾水，放入所需的瓊脂和糖，然后加熱溶解。在加熱過(guò)程中應(yīng)不斷地?cái)嚢瑁员苊猸傊冲伝蛞绯觥?

  2、待瓊脂和糖完全溶解后，按順序加入各貯備液以及所需的植物激素。

  3、用蒸餾水定容補(bǔ)充由于加熱蒸發(fā)所損失的體積。

  4、用蒸餾水調(diào)整pH。

  5、通過(guò)漏斗或下口杯將培養(yǎng)基注入組組織培養(yǎng)容器內(nèi)，注入量為瓶容積的十分之一左右。灌裝要迅速，盡可能避免培養(yǎng)基粘在瓶壁上，且應(yīng)在培養(yǎng)基未冷卻之前灌裝完畢。

  6、用封口膜或含透氣膜的塑料蓋將瓶口或試管口封嚴(yán)。

  7、將封裝好的組織培養(yǎng)容器碼放在高壓滅菌鍋內(nèi)。于105Pa壓力、121℃下滅菌20分鐘。如使用小型手提式滅菌鍋時(shí)，一定要注意，當(dāng)鍋內(nèi)壓力上升時(shí)，先反復(fù)放氣數(shù)次，將鍋內(nèi)空氣排盡以后，再計(jì)算時(shí)間，否則達(dá)不到高壓滅菌的效果。

  8、對(duì)于一些受熱易于分解的物質(zhì)，如維生素類(lèi)，可采取先過(guò)濾滅菌的方法。待培養(yǎng)基滅菌后，尚未冷卻之前(40℃左右)加入并搖勻。經(jīng)過(guò)高壓滅菌的培養(yǎng)基可在室溫下存放3-5天，或在冷藏箱內(nèi)存放10天左右，最好在短時(shí)間內(nèi)用完。