1、植物組織培養(yǎng)將采來的植物材料除去不用的部分,將需要的部分仔細洗干凈,如用適當?shù)乃⒆拥人⑾础0巡牧锨懈畛蛇m當大小,即滅菌容器能放入為宜。置自來水龍頭下流水沖洗幾分鐘至數(shù)小時,沖洗時間視材料清潔程度而宜。易漂浮或細小的材料,可裝入紗布袋內沖洗。流水沖洗在污染嚴重時特別有用。洗時可加入洗衣粉清洗,然后再用自來水沖凈洗衣粉水。洗衣粉可除去輕度附著在植物表面的污物,除去脂質性的物質,便于滅菌液的直接接觸。當然,較理想的清洗物質是表面活性物質—吐溫。
2、對材料的表面浸潤滅菌。要在超凈臺或接種箱內完成,準備好消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、無菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸濕的作用,加之70%酒精穿透力強,也很易殺傷植物細胞,所以浸潤時間不能過長。有一些特殊的材料,如果實、花蕾、包有苞片、苞葉等的孕穗,多層鱗片的休眠芽等等,以及主要取用內部的材料,則可只用70%酒精處理稍長的時間。處理完的材料在無菌條件下,待酒精蒸發(fā)后再剝除外層,取用內部材料。
3、是用滅菌劑處理。表面滅菌劑的種類較多,可根據(jù)情況選取1~2種使用見表。第四步是用無菌水涮洗,涮洗要每次三分鐘左右,視采用的消毒液種類,涮洗3~10次左右。無菌水涮洗作用是免除消毒劑殺傷植物細胞的副作用注意:
①酒精滲透性強,幼嫩材料易在酒精中失綠,所以浸泡時間要短,防止酒精殺死植物細胞。
②老熟材料,特別是種子等可以在酒精中浸泡時間長一些,如種子可以浸泡5分鐘。
③升汞的滲透力弱,一般浸泡10分鐘左右,對植物材料的殺傷力不大。
④漂白粉容易導致植物材料失綠,所以對于幼嫩材料要慎用。
⑤在消毒液中加入濃度為0.08~0.12%的吐溫20或80(一種濕潤劑),可以降低植物材料表面的張力,達到更好的消毒效果。
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